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怎么測定唾液淀粉酶的最適ph

2017-04-24 09:53:46  來源:360常識網   熱度:
導語:唾液淀粉酶(pancreaticamylase)是由唾液腺分泌的一種水解酶,而淀粉經唾液中淀粉酶的水解,生成糊精和麥芽糖。而知道唾液淀粉酶的最適ph對

唾液淀粉酶(pancreaticamylase)是由唾液腺分泌的一種水解酶,而淀粉經唾液中淀粉酶的水解,生成糊精和麥芽糖。而知道唾液淀粉酶的最適ph對于自身有好處,那么唾液淀粉酶的最適ph是多少呢,又應該怎么測定唾液淀粉酶的最適ph?

在底物過量的條件下,相同時間內,在溫度、酶濃度相同的條件下,接近最適 pH 的反應體系中消耗淀粉的量最大,剩余淀粉與過量碘液生成的顏色越淺,吸光度越小,利用分光光度計測出各管的吸光度后, 取處于升高與降低趨勢之間的較小吸光度范圍對應的 pH 值即為唾液淀粉酶的最適 pH。

一、 材料與方法 儀器:吸量管(5mL,1mL) ,試管,試管架,小燒杯, 722 型分光光度計,恒溫箱,吸耳球 試劑:0.01mol/L 碘液,0.2mol/L 磷酸氫二鈉,0.2mol/L 磷酸二氫鈉,淀粉溶液,唾 液,蒸餾水

二、方法:相同時間內,在溫度、酶濃度相同、pH 不同的條件下,酶的活度不同,水解的淀粉量不同,剩余的淀粉與過量碘液生成的顏色不同,通過在660nm測量吸光度,得出酶的最適 pH 范圍。

操作步驟:

1、唾液的獲取:蒸餾水漱口后在口中含蒸餾水,適宜時間后將蒸餾水連同唾液一同放置于事先準備好的容器中即可,在實驗過程中應注意酶的失活,為了防止此現象發生應將此液體置于冰水中冷卻。

2、不同pH緩沖液配制:根據下表配置各個pH值的緩沖溶液各10ml

3、淀粉用量的確定(為了更好觀察顏色變化,可以加入適量蒸餾水使總體積相同。混勻,觀察現象,并選擇顏色變化適中一支,記錄其用量。)

4、酶液稀釋倍數確定(為了更好觀察顏色變化,可以加入適量蒸餾水使總體積相同,混勻,觀察現象,并選擇適中一支,記錄其稀釋倍數。)

5、最適pH確定(蒸餾水調零,測定660nm處吸光度A,最后以A為縱坐標,pH為橫坐標作圖,取曲線最低點對應的pH值,即為唾液淀粉酶的最適pH值。)

從上述的實驗中或許可以得出6.8為曲線最低點對應的pH值,即為唾液淀粉酶的最適pH值。但是需要注意的是淀粉酶的測定結果受方法的影響較大,怎么測定唾液淀粉酶的最適ph?不同方法參考值亦有所不同,臨床所用方法也較多,因此必須了解所用測定方法和其參考值,才能作出正確的診斷。

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